سه عامل اصلی در جوابدهی خوب و با کیفیت در تست های الایزا (ELISA) به طور خلاصه عبارتند از:
- عامل انسانی ( دقت اپراتور در انجام مراحل آماده سازی کیت )
- عامل کیفیت کیتها از لحاظ کیفیت محلولها، نحوه و شرایط نگهداری کیت
- لوازم جانبی و دستگاههای مورد استفاده از جمله مهترین آنها دستگاه الایزا ریدر (ELISA Reader)، سمپلر الایزا (ELISA Sampler) و یا دستگاه الایزا واشر اتوماتیک (ELISA Washer) و شرایط انکوباسیون (Incubation) و Shaking
عدم رعایت نکات و ملزومات در هر یک از موارد ذکر شده، سبب نگرفتن جواب مورد قبول خواهد شد.
برای یافتن علت احتمالی نگرفتن جواب مورد قبول،پیشنهاد می شود چک لیست زیر بررسی شود:
- مرحله شستشو به درستی انجام شده، دستگاه الایزا واشر اتوماتیک از نظر کارکرد تایید شده باشد.
- مراحل توصیه شده در کیت به درستی انجام شده باشد.
- بافرهای درست استفاده شده باشد، بافر های با تاریخ مصرف معتبر
- غلظت درست از معرف ها استفاده شده باشد.
- سوبسترا های با تاریخ مصرف معتبر استفاده شده باشد
- عملکرد دستگاه الایزا ریدر تایید شده باشد و دستگاه کالیبره باشد.
- مقادیر OD خوانده شده توسط الایزا ریدر با خوانش چشمی مطابقت داشته باشد.
- بافر ها در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری شوند اما پس از رسیدن به دمای اتاق استفاده شوند.
- معرف ها در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری شوند.
- دمای انکوباسیون مطابق با مراحل توصیه شده در کیت انجام شود
- میکروپلیت ها در هنگام انکوباسیون پوشیده شوند (محفظه اتاق تاریک)
- نمونه ها بر اساس دستوالعمل از پیش تعیین شده لود شوند
- کنترل های مثبت و منفی منطقی برای هر پلیت استفاده شود
- تکرار نمونه ها (به طور مثال در دو ول تست انجام شود) جواب یکسانی بدهد